RESUMEN:
En los últimos años
las técnicas de Biología Molecular se han venido incorporado a la
rutina diagnóstica en Patología en diferentes áreas
(hematopatología, neuropatología, sarcomas,...). En la mayoría de
las ocasiones los estudios moleculares confirman el diagnóstico y
tienen un gran valor académico, aunque debe reconocerse que con
frecuencia no son esenciales en absoluto para el proceso
diagnóstico.
En el caso de los procesos linfoproliferativos, el diagnostico
diferencial de las lesiones descansa con cierta frecuencia en
determinaciones de clonalidad mediante PCR, o en la identificación
de translocaciones cromosómicas específicas: t(14;18), t(11;14);
t(2;5); reordenamientos de C-MYC, ALK, BCL10, MALT1,.... Las
técnicas de citogenética convencional y molecular han resuelto estas
cuestiones tradicionalmente cuando se dispone de tejido fresco para
cultivo. Actualmente, la estandarización de técnicas de FISH sobre
secciones de tejido fijadas en formol está simplificando
notablemente la identificación de translocaciones cromosómicas.
Con la finalidad de desarrollar procesos estandarizados, se inició
en Noviembre de 2005 el proyecto Euro-FISH, coordinado desde
Nijmegen (Dr. Han van Krieken) y esponsorizado por Dako.
Objetivo: evaluar un protocolo estandarizado a nivel europeo y
validar su utilidad diagnóstica en una serie definida de linfomas.
Para ello se desarrolla un protocolo especialmente dirigido al uso
rutinario en laboratorios de Patología, evitando excesiva
complejidad en el procedimiento y en especial en la evaluación de
resultados. El proyecto está dirigido por patólogos de los distintos
laboratorios participantes en el estudio (Inglaterra, Dinamarca,
Francia, Italia, Alemania, Holanda, Portugal y España).
Etapas del proyecto:
o 1ª Fase: evaluación del protocolo estandarizado (fondo, intensidad
de señal, morfología nuclear,...). Confirmación local en todos los
laboratorios participantes con sus propias muestras.
o 2ª Fase: evaluación de la reproducibilidad del protocolo en
diferentes laboratorios europeos. El objetivo de esta fase es
cuantificar la variabilidad interlaboratorio y la eficacia del
procedimiento en muestras parafinas siguiendo diferentes protocolos
de fijación e inclusión.
o 3ª Fase: evaluación de la utilidad en diagnóstico rutinario.
Cuantificar la sensibilidad y especificidad del procedimiento. Se
analizan muestras de tejido linfoide reactivo, DLBCL, CLL/SLL, MCL,
FCL, MALT, SMZL, Burkitt, LPL, ALCL, PTCL y T-LBL.
En el diseño del proyecto tiene especial trascendencia la
utilización de sondas de rotura, split-sigal probes o break-appart,
en lugar de las tradicionales sondas de fusión cuya interpretación
es con frecuencia tediosa y susceptible de frecuentes falsos
positivos.
Se han evaluado 16 sondas comercialmente disponibles: CCND1, BCL2,
BCL3, BCL6, BCL10, MYC, PAX5, MLT1, ALK, TCL1, IGH, IGK, IGL, TCRAD,
TCRB, TCRG.
Completadas las primeras dos fases del estudio, se ha demostrado la
validez del protocolo, reproducibilidad de la técnica y
especificidad y sensibilidad por encima del 90%.
Referencias
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2. Einerson RR, Kurtin PJ, Dayharsh GA, Kimlinger TK, Remstein ED.
FISH is superior to PCR in detecting t(14;18)(q32;q21)-IgH/bcl-2 in
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3. Buno I, Nava P, Alvarez-Doval A, Alvarez-Rodriguez F, Diez-Martin
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