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Zaragoza, 18 a 21 de mayo de 2011 - PORTADA - PROGRAMA CIENTÍFICO - PROGRAMA DE COMUNICACIONES Y PÓSTERES (PDF)

 INFORMACIÓN SOBRE COMUNICACIONES ORALES Y PÓSTERES ACEPTADOS

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Póster nº 6. Tema: Patología ginecológica

Estudio comparativo de métodos para el análisis de la hipermetilación del promotor de MLH1 en pacientes con carcinoma endometrioide de endometrio
C Pons Pérez, L Catasús Cols, S Bagué Rosell, A González Vidal, J Prat Díaz de Losada
Servicio de Patológica Hospital de la Santa Creu i Sant Pau, Institut d’Investigació Biomèdica (IIB) Sant Pau
lcatasus@santpau.cat

Introducción:El sistema de reparación Mismatch Repair (MMR) es crítico para el mantenimiento de la estabilidad genómica. Las células con deficiencia del sistema MMR acumulan mutaciones en las zonas de microsatélites (inestabilidad de microsatélites, IM) dando lugar a la iniciación del cáncer. Mutaciones en algunos de los genes de MMR (MLH1, MSH2 y MSH6) se han identificado en alrededor del 90% de los casos de cáncer colorrectal hereditario no polipósico (HNPCC). Sin embargo en el cáncer esporádico de endometrio la deficiencia es debida a la hipermetilación del promotor del gen MLH1 que provoca su silenciamiento transcripcional. Además la metilación del promotor de MLH1 se ha detectado en hiperplasias endometriales atípicas adyacentes al carcinoma. La hipermetilación de MLH1 es una alteración inicial en la patogénesis del carcinoma endometrioide de endometrio que precede al desarrollo de la inestabilidad de microsatélites.

Material y métodos:Se estudiaron un total de 49 muestras de tejido tumoral de pacientes diagnosticadas de carcinoma endometrioide de endometrio. Se analizó la expresión inmunohistoquímica de MLH1, la expresión de mRNA de MLH1 mediante RT-PCR y la inestabilidad de microsatélites mediante el panel de Bethesda (BAT 25, BAT 26, D2S123, D5S346 y D17S250). La metilación del promotor MLH1 se evaluó mediante la técnicas de MSP, que se fundamenta en la modificación diferencial de bisulfito sódico y PCR con cebadores específicos para identificar el DNA metilado y no metilado, y la técnica de MS-MLPA, que utiliza sondas que reconocen secuencias específicas de DNA que contienen dianas de restricción para el enzima HhaI sensible a la metilación. Se compararon los resultados de los dos métodos de detección de la metilación del promotor con los de la expresión de MLH1 y la IM mediante el análisis de Kappa de Cohen.

Resultados:Un 45% (22/49) de los tumores presentaron hipermetilación del promotor de MLH1 con uno o ambos análisis. En la comparación de los métodos con la pérdida de expresión de MLH1 la sensibilidad y especificidad del método de MSP fue del 69% y del 76% respectivamente, y Kappa de 0,46 (p=0,001). Mientras que para el método de MS-MLPA la sensibilidad y especificidad fue del 81% y del 78% respectivamente, y Kappa de 0,52 (p=0,000). En la comparación con la inestabilidad de microsatélites siempre se obtuvieron valores de sensibilidad y especificidad ligeramente más bajos.

Conclusión:La determinación de la hipermetilación del promotor de MLH1 mediante la técnica MS-MLPA ha demostrado ser la herramienta más sensible y específica.

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